柱后衍生-高效液相色譜法測(cè)定化妝品中游離甲醛含量
一、范圍
化妝品目前已成為大多數(shù)人生活中必不可少的一部分，它的成分安全也因引起了很大的關(guān)注。本方法采用了柱后衍生-高效液相色譜法測(cè)定化妝品中游離甲醛含量。本方法適用于水劑、膏霜乳液、凝膠類(lèi)化妝品中(烏洛托品除外)游離甲醛含量的測(cè)定。
二、方法提要
樣品中的游離甲醛經(jīng)高效液相色譜分離，柱后衍生，在420nm波長(zhǎng)下檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間定性，峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。取0.2g 樣品時(shí)，本方法對(duì)游離甲醛的檢出濃度為0.003%，最低定量濃度為0.005%。
柱后衍生-高效液相色譜法測(cè)定化妝品中游離甲醛含量
三、試劑和材料
所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682 規(guī)定的一級(jí)水。
1.甲醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)水溶液，使用前要進(jìn)行標(biāo)定(標(biāo)定要用到的的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液需提前兩周配置)。
2.磷酸
3.乙酸銨
4.冰乙酸
5.乙酰丙酮
6.二氯甲烷
7.磷酸溶液：在容量瓶中加入998mL水，移取2mL磷酸緩緩加入水中，混勻。
8.柱后衍生溶液：稱(chēng)取62.5g乙酸銨放入容量瓶中，移取7.5mL冰乙酸和5mL乙酰丙酮到容量瓶中，加水至1000mL定容，搖勻。在25℃密封避光保存，該溶液有效使用期3天。
9.甲醛系列標(biāo)準(zhǔn)溶液：用移液槍精密量取甲醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)水溶液適量，用磷酸溶液稀釋成 1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。
四、 儀器和設(shè)備
1.高效液相色譜儀，具有二極管陣列檢測(cè)器。
2.柱后衍生儀。
3.天平。
4.離心機(jī)。
5.渦旋振蕩器
五、分析步驟
1、樣品前處理
稱(chēng)取樣品0.2g(精確至0.001g)放入10mL具塞比色管中，加磷酸溶液至刻度，渦旋處理1分鐘，在5000轉(zhuǎn)/分的速度下離心5min，提取上清液，經(jīng)過(guò)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為待測(cè)溶液，并盡快測(cè)定。
必要時(shí)，可以取上清液加入10mL二氯甲烷，振搖，靜置分層后取出上層溶液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，將濾液作為待測(cè)溶液。
甲醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)水溶液標(biāo)定：
⑴、試劑和材料
所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。
1硫酸
2氫氧化鈉溶液：稱(chēng)取氫氧化鈉4g置容量瓶中，用少量水溶解，再加水至100mL定容，混勻。
3 硫酸溶液①：移取硫3mL硫酸，緩慢加入到有97mL水的容量瓶中，混勻。
4 硫酸溶液②：移取10mL硫酸，緩慢加入到90mL水的容量瓶中，混勻。
5 淀粉溶液：稱(chēng)取可溶性淀粉1g，加入5mL水調(diào)成溶液后，加入95mL沸水，煮沸，后加入氯化鋅0.4g防腐。
6 碘標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取碘13.0g和碘化鉀35g放入大燒杯中，加入100mL水，溶解后滴入3滴鹽酸，用水稀釋至1L，過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至棕色瓶中。
7 重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液[c(1/6K2Cr2O7)]：準(zhǔn)確稱(chēng)取在120℃干燥到恒重的重鉻酸鉀基準(zhǔn)物質(zhì)4.9031g與大燒杯中，加水溶解后，轉(zhuǎn)移至1L容量瓶中定容，搖勻。
8 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取硫代硫酸鈉26g放入有1L新煮沸放冷的水的燒杯中溶解，加入0.4g氫氧化鈉，搖勻，轉(zhuǎn)移到棕色玻璃瓶?jī)?nèi)儲(chǔ)存起來(lái)，放置兩周后過(guò)濾。過(guò)濾后進(jìn)行標(biāo)定濃度：準(zhǔn)確量取重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液25.00mL放入500mL碘量瓶中，加入2.0g碘化鉀和20mL硫酸溶液②后，立即密塞，搖勻，于暗處放置10min。再加入150mL水，用硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液顯淺黃色時(shí)，加入2mL淀粉溶液，繼續(xù)滴定至溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)榱辆G色。同時(shí)做空白試驗(yàn)。并且計(jì)算硫代硫酸鈉溶液的濃度：
c(Na2S2O3)=c(K2Cr2O7)×25.00/(V1?V0)
式中：c(Na2S2O3)——硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L;
c(K2Cr2O7)——重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度[c(1/6K2Cr2O7)]，mol/L;
V1——滴定重鉻酸鉀消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，mL;
V0——滴定空白消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，mL。
⑵、標(biāo)定
準(zhǔn)確量取甲醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)水溶液適量(相當(dāng)于甲醛10～20mg)于250mL碘量瓶中，加入50.00mL碘標(biāo)準(zhǔn)溶液，5mL氫氧化鈉溶液，加塞，搖勻放置15min，再加入20mL硫酸溶液①，立即塞緊，混勻，于暗處放置15min，用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液顯淡黃色時(shí)，加入2mL淀粉溶液，繼續(xù)滴定至溶液的藍(lán)色剛好褪去，記錄消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。同時(shí)做空白試驗(yàn)。并計(jì)算甲醛的濃度：
ρ(HCHO)=(V0?V1)×c×15×1000/V
式中：ρ(HCHO)——甲醛溶液的濃度分?jǐn)?shù)，mg/L;
V——甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液取樣體積，mL;
V0——滴定空白溶液消耗的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL;
V1——滴定甲醛溶液消耗的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL;
c——硫代硫酸鈉溶液的摩爾濃度，mol/L;
15——甲醛(1/2HCHO)摩爾質(zhì)量，g/mol。
2、色譜參考條件
色譜柱：C18 色譜柱(250×4.6mm×5μm);
流動(dòng)相：磷酸溶液;
流速：1.0mL/min;
柱溫：20℃;
檢測(cè)波長(zhǎng)：420nm;
進(jìn)樣體積：10μL;
柱后衍生溶液流速：0.5mL/min;
衍生溫度：100℃。
3、測(cè)定
在上述色譜條件下，取甲醛系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各10μL分別進(jìn)樣，進(jìn)行液相色譜分析，以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，甲醛衍生物的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，方程為Y=77.47X+34.89，相關(guān)系數(shù)為0.9999。
取處理得到的待測(cè)溶液進(jìn)樣10μL，進(jìn)行色譜分析，根據(jù)保留時(shí)間和光譜圖定性，測(cè)得甲醛衍生物的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)溶液中游離甲醛的質(zhì)量濃度。最后計(jì)算樣品中游離甲醛的含量。若樣品中游離甲醛含量超過(guò)0.05%時(shí)，可采用液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜進(jìn)行確證。若樣品游離甲醛含量未超過(guò)0.05%，則不需要這一步。
六、分析結(jié)果的表述
1、計(jì)算
式中：(游離甲醛)——化妝品中游離甲醛的含量，%;
m——樣品取樣量，g;
ρ——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的樣品中甲醛的質(zhì)量濃度，μg/mL;
V——定容體積，mL。
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值均不超過(guò)算術(shù)平均值的 5%。
2、回收率和精密度
回收率為96.8% ～ 108.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3%。
甲醛(4.542min)
八、樣品確證
1、 樣品處理
稱(chēng)取樣品0.2g(精確至0.001g)于10mL具塞比色管中，加五氟苯肼溶液(稱(chēng)取五氟苯肼1.0g，放入1000mL容量瓶中，用磷酸溶液溶解并定容，搖勻。)至刻度，渦旋處理1分鐘，5000rpm 離心5min，取上清液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液作為待測(cè)溶液，立即測(cè)定。另取甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液(與樣品中游離甲醛的量相當(dāng))于10mL 具塞比色管中，同法處理。
2 、液相色譜-質(zhì)譜法參考條件
色譜參考條件：
色譜柱：C18柱(2.1mm×150mm×3.5μm);
流動(dòng)相A：水;
流動(dòng)相B：乙腈;